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      四種色譜分離技術

      更新時間:2022-12-20      點擊次數:963

      色譜法利用不同物質在不同相態的選擇性分配,以流動相對固定相中的混合物進行洗脫,混合物中不同的物質會以不同的速度沿固定相移動,最終達到分離的效果。

      色譜類型

      根據分離機理的不同,色譜可分為五種類型:吸附、分布、交換、排阻和親和。色譜分離方法包括吸附色譜、鍵合相色譜、離子交換色譜、親和色譜和尺寸排阻色譜。

      幾種色譜分離技術的比較

      親和色譜
      親和色譜是色譜分離技術的一個重要分支。它是一種液相色譜方法,利用固定相的結合特性吸附目標產物并實現分離和純化。例如,酶和基質(或抑制劑)、抗原和抗體、激素和受體、外源凝集素和核酸堿基對等之間的特異相互作用,等可形成一種具有不溶性載體的相互作用物質,均可用作色譜固定相。然后可以從復雜的混合物中可逆地攔截另一方,以達到純化的目的。親和層析已廣泛應用于生物分子的分離和純化,是分離純化結合蛋白、酶、抑制劑、抗原、抗體、激素、激素受體、糖蛋白、核酸、多糖等生物大分子的重要方法之一。

      尺寸排阻色譜
      尺寸排阻色譜(SEC)也稱為凝膠色譜,利用分子篩使大小和數量不同的分子,根據各組分的排阻能力不同完成組分的分離。小分子量化合物可進入孔中并具有較長的停留時間,而大分子量化合物被阻止進入孔中,繼續隨流動相流動。當洗脫液為水溶液或緩沖液時,稱為凝膠過濾色譜(GFC),在生物學領域應用廣泛;當使用有機溶劑作為洗脫液時,稱為凝膠滲透色譜(GPC),被廣泛用于高分子領域。尺寸排阻色譜通常用于分離高分子化合物,如組織提取物、多肽、蛋白質和核酸。
      凝膠過濾色譜基于蛋白質分子量或分子形狀的差異對樣品進行分離。當樣品從色譜柱頂部向下移動時,大的蛋白質分子無法進入凝膠顆粒并被快速洗脫;而較小的蛋白質分子可以進入凝膠顆粒,并且較小的蛋白質進入凝膠的保留時間不同。分子量越大,洗脫時間越早,從而使具有不同分子大小的蛋白質被分離。

      鍵合相色譜
      根據分離組分在流動相和固定相中的溶解度不同,對樣品進行分離。該方法使用一種特殊的液體物質涂覆載體表面,或與載體表面化學鍵合以形成固定相。涂覆固定(第一種操作方法)現在很少使用,化學鍵合固定相如C18、C8、氨基柱、氰基柱和苯基柱,在工業上常用。根據固定相和流動相的類型,液相色譜可分為正相色譜(NPC)和反相色譜(RPC)。隨著柱填料的快速發展,反相色譜的應用范圍逐漸擴大,現已應用于分析一些非極性樣品或易分離的樣品。

      吸附色譜
      吸附色譜法使用固體吸附劑分離混合物中的組分,常用的吸附劑是硅膠或氧化鋁。該方法基于固定的相對組分吸附力的大小來分離各組分。整個過程取決于吸附-解吸的平衡。這種分離方法適用于分離分子量為200-1000的異構體以及非離子化合物。局限性是離子化合物的分離容易拖尾。


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